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2018年执业药师考试药学专业知识一笔记(12)
杂质的去除方法是什么
酶提取液中常含有杂蛋白、多糖、脂类及核酸等杂质,可用下述方法去除:
调PH和加热法:利用蛋白质对酸、碱和热变性方面性质的差异,可去除非活性杂蛋白。如制备脂肪酶时,在pH3、4时以400C温度加热150 min,淀粉酶活力可丧失90%而被除去,而脂肪酶活力仍保持80%以上。
蛋白质表面变性法:蛋白质表面变性后其性质有所不同,借以去除杂蛋白。如制备过氧化氢酶时,加入氯仿和乙醇进行振荡可以将杂蛋白变性而去除。
蛋白质沉淀剂法:利用醋酸铝、利凡诺、单宁酸、离子型表面活性剂等蛋白质沉淀剂可以去除杂蛋白及粘多糖类杂质。使用时要注意这类试剂常可引起酶变性失活,因此应迅速除去。
选择性变性法:各种蛋白质对变性剂的稳定性不同,可以用选择性变性剂去除杂蛋白。如细胞色素丙对三氯醋酸较稳定,所以在制备时可用2.5%三氯醋酸使其他杂蛋白变性使沉淀除去。
加保护剂热变性法:酶与底物或竞争性抑制剂结合后,其稳定性常显著增加。所以常用它们为保护剂,再用一些剧烈手段破坏杂蛋白,如用D-甲基苯甲酸为D-氨基酸氧化酶的保护剂,经加热除去杂蛋白,使该酶得到很好的提纯。
核酸沉淀剂法:酶液中的核酸类杂质,可以用氯化锰、鱼精蛋白硫酸盐等沉淀剂使其沉淀而除去。必要时,也可用核糖核酶将核酸降解后除去。
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